一文了解酶标仪验证和如何选择合适的酶标仪

酶标仪，即酶联免疫检测仪器，是酶联免疫吸附试验的专用仪器，又称微孔板检测器。酶标仪验证是确保其性能符合使用要求的重要步骤，主要包括以下方面：

一、酶标仪的基本原理

酶标仪主要由光路系统与信号采集系统组成。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上。光电检测器将光信号转换成相应的电信号，经过一系列信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后显示结果。

二、酶标仪的分类

1. 按自动化程度分类：酶标仪在使用过程中分为半自动和全自动两种，但工作原理基本一致。

2. 按滤光方式分类：酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长；而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。

3. 按功能分类：酶标仪可以分为单功能酶标仪（分为光吸收、荧光、化学发光等）和多功能酶标仪。多功能酶标仪是两种或更多检测模块的集成，通常情况下至少可提供光吸收、荧光这两种最常见检测功能，而一些中GD多功能酶标仪还可支持化学发光、时间分辨荧光、荧光偏振、生物发光共振能量转移，甚至还可以支持“Western Blot"和“上转换发光"等检测。

三、酶标仪的验证内容

1. 安装确认：主要进行文件确认、安装环境的确认等。

2. 运行确认：主要进行功能确认（软件和硬件）、示值读数测试。

3. 性能确认：主要进行波长、吸光度、发光测试等。

四、酶标仪性能评价与鉴定方法

1. 滤光片波长精度检查及其峰值测定：用高精度紫外可见分光光度计（波长精度±0.3nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫描，检测值与标定值之差即为滤光片波长精度，其差值越接近于零且峰值越大表示滤光片的质量越好，波长精度越高。

2. 灵敏度和准确度的监测：

• 灵敏度：精确配制6ug/ml重铬酸钾（干燥）溶液（0.05mol/L硫酸溶解），加入200ul重铬酸钾溶液于小孔杯中，以0.05mol/L硫酸溶液作空白，于450nm（参比波长650nm）测定，其吸光度应≥0.01A。

• 准确度：准确配制1mmol/L对硝基苯酚（提纯品）水溶液，然后以10mmol/L氢氧化钠溶液25倍稀释之，加入200ul稀释液于小孔杯中，以10mmol/L NaOH溶液作空白，于405nm（参比波长650nm）检测，其吸光度应在0.4A（0.395~0.408A）左右。

• 通道差与孔间差检测：

• 通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液200uL后置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长490nm，参比波长630nm或650nm）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性，可用极差值来表示其通道差。

• 孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条（8条共96孔）分别加入200ul甲基橙溶液（吸光度调至0.065~0.070A）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用±1.96s衡量。

• 零点飘移：取八只小孔杯，分别置于八个通道的相应位置，均加入200ul蒸馏水并调零，采用双波长或单波长（490nm）每隔30min测定一次，观察8个通道4h内的吸光度变化。零点飘移是评价仪器在一定时间内零点吸光度的变化趋势，与波长无关，它间接地反映了仪器内部检测系统在单位时间内处于工作状态下的稳定性及仪器的机械性能情况。

• 精密度评价：每个通道三只小杯，分别加入200ul高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，采用双波长作双份平行测定，每日测定两次，连续测定20天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及相应的CV值。

综上所述，酶标仪验证是一个复杂而细致的过程，涉及多个方面的测试和评估。通过严格的验证步骤和方法，可以确保酶标仪的性能稳定可靠，为科研和临床检测提供准确的数据支持。

酶标仪广泛应用于临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学等领域。以下是选择适合自己的酶标仪时需要考虑的因素：

1. 外观与空间适应性：

• 酶标仪的体积不宜过大，以适应检验室有限的空间，避免占据过多空间，给其他工作带来不便。

• 外形美观、小巧的机型更受欢迎。

• 酶标仪外壳应易于消毒和清洁，以适应检验过程中经常会有样品液体外溅的情况。

• 操作便捷性：

• 仪器操作应简便，对于国产酶标仪，菜单最好使用中文显示，以方便检验人员理解和操作。

• 仪器上应有明确的仪器名称、型号、编号、生产厂家、出厂日期和电源电压等信息。

• 各调节旋钮、按键和开关应能正常工作，外表面无明显机械损伤。

• 显示文字应清楚完整。

• 技术性能：

• 酶标仪应能容纳更多的信息，以便于法律评判和医疗纠纷处理。

• 需要了解酶标仪的稳定性（漂移）、吸光度测定的准确度、重复性、线性以及测定速度等关键技术指标。

• 吸光度测定范围应满足实验需求，一般在0~2.5之间即可满足ELISA的测定要求，但现在已有更高范围的酶标仪，可根据实验需求选择。

• 比色与打印速度：

• 对于标本量较大的医院或实验室，应选择能够快速进行比色和打印的酶标仪，以节省检测人员的时间和确保检验结果的准确性。

• 附加功能：

• 根据实验需求，可选择具有震板功能、温育功能、软件功能等附加功能的酶标仪。震板功能有助于在比色测定前振荡混匀ELISA板孔内的颜色；温育功能则可使ELISA测定中的微孔板条在仪器内部完成温育过程；软件功能则提供了对ELISA定性和定量测定及其他测定方式的统计分析并报告结果的功能。

综上所述，选择适合自己的酶标仪需要考虑多个因素，包括外观与空间适应性、操作便捷性、技术性能、比色与打印速度、品牌与售后服务以及附加功能等。建议根据实验需求和实验室条件进行综合考虑，选择性价比高的酶标仪。